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银杏萜类内酯含量测定使用外标四点法可靠性的探讨

银杏合同 2020-10-15 01:00:11 0
【摘要】目的探讨外标四点法的可行性。 方法HPLC方法,色谱柱:ALLTECH C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相:正丙醇-四氢呋喃-水(1:15:85),流速1.0ml / min,ELSD参数:漂移管温度108.0 ℃; 载气(压缩空气)流量为3.10L / min。 结果采用外标四点法求得回归方程,经统计方法证明,相关系数r具有显着性。 结论外标四点法可用于测定银杏萜类内酯的含量。

银杏萜类内酯含量测定使用外标四点法可靠性的探讨

[关键字] 银杏叶萜烯内酯; 内容确定; HPLC-ELSD; 外标四点法

ESMoffpoint的Studyon可靠性用于测定银杏内酯的测定

[摘要]客观ESMoffpoints的Studyon可靠性。方法HPLC系统由Alltech C18色谱柱(4.6mm×250mm,水基为1:1,水为5μm,苯甲酸为1,5μm),四水合苯甲酸,流动相为四氢呋喃。 0ml / min。检测器温度为108.0℃,干燥气体流速为3.10L / min。结果已建立ESMoffourpoint。结论可使用ESMoffpoint确定银杏内酯的含量。

【关键词】银杏萜烯内酯; 化验 HPLC-ELSD; ESMoffourp美甲

关于银杏叶片中萜内酯含量测定方法的报道很多。 目前,用于测定银杏叶制剂中萜内酯含量的大多数方法是HPLC [1〜3]。 我们还使用了《 2005年中国药典》 [4]中包括的HPLC方法和蒸发光散射检测器进行测定。 HPLC-ELSD使用外标两点法的对数方程计算白果内酯,银杏内酯A,银杏内酯B和银杏内酯C的含量。银杏的四种类型 酯含量的“ B”是萜内酯的含量。 在实际工作中使用外标两点法时,很难判断对照溶液的配制是否准确,工作曲线(n = 2)是否与外标两点法相对应。 是可靠的。 因此,同时制备两种对照溶液,分别测量5μl和10μl,并使用四种浓度和相应峰面积的标准曲线(n = 4)来获得回归方程和相关系数r。 回归方程是否成立[5]。

1仪器和试剂

1.1仪器高效液相色谱仪:SHIMADZU-10A; 蒸发光散射检测仪ALLTECHELSD2000。

1.2从中国医药生物制品检定所购得的试验药物白叶内酯,银杏内酯B,银杏内酯C为参考物质; 银杏 phyllactone在SIGMA中购买的参考物质。 甲醇色谱纯。 水是自制的超纯水; 其他试剂均为分析纯。

2方法和结果

2.1色谱条件和系统适应性测试色谱柱:ALLTECHC18(4.6mm×250mm,5μm); 流动相:正丙醇-四氢呋喃-水(1:15:84); 流速1.0ml / min; ELSD参数:漂移管温度108.0°C; 载气(压缩空气)流量3.10L / min; 柱温35℃; 样品量5、15μl。 基于银杏内酯峰的理论塔板数不得少于2500,相邻峰的分辨率应大于1.5。

2.2参比溶液的制备称量银杏内酯,银杏系统内酯A,银杏系统内酯B和银杏系统内酯,并用五氧化二磷干燥过夜。 C.将适量的参考物质放入相同的10ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,混合均匀,得到。

2.2.1参照物质溶液:22.73mg银杏内酯,银杏内酯A13.42mg,银杏内酯B11.13mg和银杏内酯C9.05mg。

2.2.2对照品溶液二比巴利特14.71mg,银杏内酯A11.34mg,银杏内酯B12.24mg和银杏内酯C18.99mg。

使用参考物质浓度的自然对数InC(x)作为横坐标,以峰面积InA(y)的自然对数作为纵坐标绘制该图,请参见图2- 5,

图中的四个点倾向于形成一条直线。 在直线方程y = ax + b中,通过统计计算根据公式1、2和3来计算两个常数a,b和直线。 相关系数r示于表2。

2.3外标四点法线性回归方程的确定。 分别精确吸取一个和两个5μl和15μl的参比溶液,并将其注入液相色谱仪中。 根据上述色谱条件确定并记录色谱图。 结果:银杏内酯(tR = 8.375),银杏系统内酯A(tR = 9.811),银杏系统内酯B(tR = 12.040)和银杏系统内酯C(tR = 7.194),相邻组分的分离效果良好 (请参见图1)。 浓度和峰面积的数据及处理方法示于表1。

图1萜内酯对照溶液的HPLC图

(峰序列为银杏内酯C,白果内酯) ,银杏内酯A,银杏内酯B)

表1对照注射量(μg)和峰面积

图2〜5

1

2.4线性回归方程的统计检验

2.4.1相关系数检验方法相关系数表示两个变量之间关系的紧密程度。 相关系数测试方法用于测试相关系数的显着性。 参见表2。

表2回归方程和相关系数r的计算结果以及r的t值检验rn = 4,当显着性水平α为0.01时,检查相关性 系数临界值表在表2中得到r0 .01,4 = 0.90,r> r0.01,4,表明所建立的回归方程是有意义的。

2.4.2 t检验相关系数的显着性的方法r t检验相关系数的方法对于显着性检验,公式4如下:

t> t(n-2),在0.01时,x(InC)和y(InA)之间的相关性非常显着。 查表,t(2)0.01 = 9.93。 在表2中,t均> t(2)0.01,因此认为x(InC)与y(InA)之间存在线性相关。 可以建立外标四点对数方程法的直线。

2.4.3外标四点法的重复性研究取对照一和对照二,按照标准曲线的编制进行六次实验,分别得到六套标准曲线和相关系数r, 参见表3。

表3外标四点法所得回归线的比较

3结论

与外标对应的标准曲线的相关系数 实验数据中的标准四点法均大于r0.01,4 = 0.90,线性相关和回归方程是有意义的。 当相关系数大于0.990时,可以使用在实验中获得的回归方程来计算内酯含量。 该方法增加了标准曲线的可靠性,可以有效地控制制剂的质量。

[参考文献]

1MarkBlumenthal.Gerkgolivlactonelevelsinginkgoleaf.Gerkgolivlactonelevelsinginkgoleaf.HerralGram,1997,(41):29。

2ZhangL,ChenXP,DongXP等。 银杏 Ye Capsules的含量)。 江苏医药与临床研究,2004,12(1):29-32。 天津药学,2005,17(1):11-13。

4ChP。(中国药典).2005。

5姜自刚,顾雪梅。 分析检验的质量保证和计量认证。 上海:华东理工大学出版社,1998,50-210。

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